I prudutti

Novu test di cromatografia liquida d'altu rendiment per glicosiltransferasi basatu nantu à derivatizazione cù l'acidu antranilic è a rilevazione di fluorescenza.

I saggi sò stati sviluppati utilizendu a chimica di etichettatura unica di l'acidu 2-aminobenzoicu (2AA; l'acidu antranilic, AA) per a misurazione di l'attività sia di β1-4 galactosyltransferase (GalT-1) sia di α2-6 sialyltransferase (ST-6) da un liquidu d'alta prestazione. cromatografia (HPLC) cù a deteczione di fluoriscenza (Anumula KR. 2006. Avanzate in i metudi di derivatizazione di fluoriscenza per l'analisi cromatografica di liquidu d'altu rendiment di carbuidrati di glicoproteini. Anal Biochem. 350: 1-23).N-Acetylglucosamine (GlcNAc) è N-acetyllactosamine sò stati usati cum'è accettori è uridine diphosphate (UDP) -galactose è cytidine monophosphate (CMP) -N-acetylneuraminic acid (NANA) cum'è donatori per GalT-1 è ST-6, rispettivamente.I prudutti enzimatici sò stati etichettati in situ cù AA è sò stati separati da i sustrati nantu à a colonna TSKgel Amide 80 cù cundizioni di fase normale.L'unità di l'enzyme sò state determinate da e zone di picchi per paragunà cù i standard derivati ​​simultaneamente Gal-β1-4GlcNAc è NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc.Linearità (concentrazione di tempu è enzima), precisione (intra- è interassay) è riproducibilità per i saggi sò stati stabiliti.I saggi sò stati trovati utili in u monitoraghju di l'attività enzimatica durante l'isolamentu è a purificazione.I saggi eranu assai sensibili è eseguiti uguali o megliu cà e misure tradiziunali basate in zuccheru radioattivu.U formatu d'assay pò ancu esse usatu per a misurazione di l'attività di l'altri transferasi, sempre chì l'accettori di carbuidrati cuntenenu una fine di riduzzione per l'etichettatura.Un test per l'accettori di glicoproteina hè statu sviluppatu cù IgG.Un breve metudu di profilazione HPLC hè statu sviluppatu per a separazione di glicani IgG (biantennari G0, G1, G2, mono- è disialylated), chì facilitò a determinazione di l'attività GalT-1 è ST-6 in una manera rapida.Inoltre, stu metudu di profilazione deve esse utile per monitorizà i cambiamenti in i glicani IgG in ambienti clinichi.