I prudutti

U modu da quale l'effetti di mutazioni simultanee si combinanu per cambià l'attività enzimatica ùn hè micca facilmente prevedibile perchè questi effetti ùn sò micca sempre additivi in ​​modu lineale.Dunque, a carattarizazione di l'effetti di mutazioni simultanee di i residui d'aminoacidi chì liganu u sustrato pò fà una cuntribuzione significativa à a cunniscenza di a specificità di u sustrato di l'enzimi.In a beta-glycosidase da Spodoptera frugiperda (Sfbetagly), i dui residui Q39 è E451 interagiscenu cù u sustrato è questu hè essenziale per definisce a specificità di u substratu.Doppiu mutanti di Sfbetagly (A451E39, S451E39 è S451N39) sò stati preparati da mutagenesi diretta à u situ, espressi in batteri è purificati cù cromatografia di affinità.Questi enzimi sò stati carattarizati cù p-nitrofenil beta-galactoside è p-nitrofenil beta-fucoside cum'è sustrati.U rapportu k cat / Km per i mutanti singuli è doppiu di Sfbetagly chì cuntenenu mutazioni dirette à u situ in i pusizioni Q39 è E451 hè stata aduprata per dimustrà chì l'effettu nantu à l'energia libera di ESdouble dagger (complessu di stati di transizione enzyme) di e mutazioni doppie (Gdouble). daggerxy) ùn hè micca a summa di l'effetti risultanti da e mutazioni uniche (Gdouble daggerx è Gdouble daggery).Sta differenza in Gdouble dagger indica chì l'effetti di e mutazioni singuli si sovrapponenu parzialmente.Dunque, stu effettu cumunu conta solu una volta in Gdouble daggerxy.I dati cristallografichi nantu à i beta-glicosidasi palesanu a prisenza di un ligame d'idrogenu bidentatu chì implica i residui Q39 è E451 è u stessu gruppu idrossilu di u sustrato.Dunque, i dati termodinamici è cristallografici suggerenu chì i residui Q39 è E451 esercitanu una influenza mutuale nantu à e so interazzioni rispettivi cù u sustrato.